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CRISPR-Cas9

CRISPR-Cas9のページを更新2012年に、ZFNやTALENより、さらに簡便に作製できる人工ヌクレアーゼが開発されました。それが、CRISPR-Cas9です。作製が簡便・高効率なことに加え、基礎研究なら誰でも自由に使えるため、急速に広がって現在の主流となっています。CRISPR-Cas9の作製が簡便なのは、DNA認識・結合部分に酵素ではなく、RNAを用いるからです。RNAとは、DNAと同じ核酸です。前述のとおりDNAがA、T、G、Cの4種類の塩基から構成されるのに対し、RNAはA、U（ウラシル）、G、Cの4種類の塩基から構成され、DNAのように2本鎖ではなく1本鎖を作ります。DNAの塩基A、T、G、CはRNAの塩基U、A、C、Gとそれぞれ水素結合を形成します。そのため、DNAの特定の塩基配列と水素...CRISPR-Cas9

2023/09/17 13:15

ZFN

ZFNのページを更新最初の人工ヌクレアーゼは、1996年に開発されたZFNです。ZFNは「制限酵素」を元にして作られました。制限酵素とは、細菌中で増殖するウィルス「ファージ」などから、細菌が身を守るための防御機構です。侵入してくるファージなどのDNAを制限酵素が切断し、不活性化します。多くの制限酵素は、ゲノムDNA上の4～6個の塩基の特定の配列を認識し、その場所を切断します。しかし、4～6個の塩基では、同じ配列がゲノムDNA上に多数存在することになり、制限酵素をただ使ったのではゲノムはバラバラになってしまいます。そこで、より多くの数の塩基配列を認識できるように人工的に作られたのが、ZFNです。ZNFは、DNAの認識・結合を担うZFと、DNAの切断を行うFok1から構成されます。ZFは3個の塩基配列を認識で...ZFN

2023/09/13 11:10

エキソヌクレアーゼ（exonuclease）

エキソヌクレアーゼ（exonuclease）エキソヌクレアーゼ（exonuclease）は、ポリヌクレオチド鎖の末端(エキソ)からヌクレオチドを一度に1つずつ切断することによって機能する酵素です。3'または5'末端のいずれかでホスホジエステル結合を切断する加水分解反応が発生します。その近縁種はエンドヌクレアーゼであり、ポリヌクレオチド鎖の中間(エンド)にあるホスホジエステル結合を切断します。真核生物と原核生物には、mRNAの正常な代謝回転に関与する3種類のエキソヌクレアーゼがあります:5'から3'エキソヌクレアーゼ(Xrn1)は、依存性の脱キャップタンパク質です。;3'から5'エキソヌクレアーゼ、独立したタンパク質。およびポリ(A)特異的な3'→5'エキソヌクレアーゼ。古細菌と真核生物の両方において、RN...エキソヌクレアーゼ（exonuclease）

2023/08/16 07:04

エンドリボヌクレアーゼの種類

エンドリボヌクレアーゼの種類のページを更新内部からRNAを分解するエンドリボヌクレアーゼ、外側から分解していくエキソリボヌクレアーゼの2種に分類される。エンドリボヌクレアーゼの種類ENZYME種類メモEC3.1.27.5RNaseA研究に広く使用されるRNaseである。RNaseA（たとえばbovinepancreaticribonucleaseA:PDB:2AAS）は研究室で一般に用いられる酵素の中で最も丈夫なもののひとつであり、RNaseAを精製する方法の一つに、細胞の抽出物を煮沸しRNaseA以外のすべての酵素を変性させるというものもあるほどである。RNaseAは一本鎖RNAの配列に特異的であり、一本鎖のC残基またはU残基（ピリミジン残基）の3'末端を切断して、3'末端リン酸化物を生じる。EC3.1...エンドリボヌクレアーゼの種類

2023/08/12 15:14

リボヌクレアーゼ（ribonuclease）

リボヌクレアーゼ（ribonuclease）のページを更新リボヌクレアーゼ(ribonuclease,RNase)はリボ核酸を分解してオリゴヌクレオチドあるいはモノヌクレオチドにする反応を触媒する酵素。ヌクレアーゼの一種で、RNase(RNアーゼまたはRNエース)とも呼ばれる。あらゆる生物に遍く存在する酵素で、内部からRNAを分解するエンドリボヌクレアーゼ、外側から分解していくエキソリボヌクレアーゼの2種に分類される。塩基を識別して分解を行う基質特異性の高いものもあり、種類は多様である。主なものとして塩基の種類を問わないリボヌクレアーゼT2(EC3.1.27.1)やピリミジン塩基のある部分だけ切断するリボヌクレアーゼA(EC3.1.27.5)、グアニンの部分のみを分解するリボヌクレアーゼT1(EC3.1....リボヌクレアーゼ（ribonuclease）

2023/08/08 10:50

【第3回】なぜDNAポリメラーゼは5’から3’へしか進めないのか？DNAの複製機構を詳しく解説！

はじめに今回のテーマはDNA複製です。DNA複製時のミスは進化生物学的な視点で見ると必要です。なぜなら、DNA複製時のミスは個体間の多様性を生み出し、同じ種の生命体が一気に絶滅する確率を低くするからです。 DNA複製ミスが起こらないと同じよ

2023/01/10 19:49